Заражение экспериментальное

Искусственное введение лабораторным животным исследуемой культуры микроорганизмов, токсинов или материала, в котором предполагается наличие микробов или их токсинов.

В микробиологии экспериментальное заражение применяют с целью:

Этапы проведения

1. Выбор лабораторного животного

Выбор основывается на известной чувствительности конкретных видов животных к определённым микроорганизмам.

Для опыта отбирают здоровых, стандартизированных по породе, линии, массе, возрасту, полу и упитанности животных. Признаки здоровья:

  • Гладкая и блестящая шерсть.
  • Чистые глаза.
  • Отсутствие выделений из носа, глаз, рта, половой щели.
  • Чистое заднепроходное отверстие.
  • Хороший аппетит.
  • Нормальная реакция на стук и другие раздражители.

2. Подготовка материала

Культуру для заражения стандартизируют по плотности, возрасту и суспендирующей жидкости. Материал должен быть:

  • Забран в асептических условиях в стерильную посуду.
  • Гомогенизирован.
  • Использован для экспериментального заражения как можно быстрее.

3. Способ заражения

Зависит от типа материала, вида животного и предполагаемого патогена. Материал может быть введён:

  • Накожно, подкожно, внутрикожно.
  • Внутримышечно, внутрибрюшинно, внутривенно.
  • Через нос, рот, прямую кишку.
  • В сердце, желудок, мозг, вагину, яичко, конъюнктиву, суставные полости.

Перед заражением с операционного поля удаляют шерсть и обрабатывают его 70% этанолом с последующим смазыванием настойкой йода.

4. Обезболивание и фиксация

При болезненных вмешательствах проводят предварительное обезболивание:

  • Мелких животных помещают в закрытый стеклянный сосуд с ватой, смоченной эфиром или хлороформом, до засыпания.
  • Кроликов усыпляют с помощью специальной маски или бумажного конуса на носу, в узком конце которого находится смоченная эфиром вата.

Во время заражения животное должно быть надёжно зафиксировано:

  • Мышей фиксируют левой рукой за кожную складку затылка (или шеи) и за хвост (иногда за хвост и заднюю лапку).
  • Крыс — корнцангом.
  • Морских свинок и кроликов пеленают в халат, полотенце или помещают в специальный станок.

Материал вводят стерильным шприцем с соблюдением правил асептики.

5. Маркировка животных

  • Мышей маркируют окраской пикриновой кислотой или спиртовым раствором фуксина, надрезом края уха, обрезанием коготков.
  • Более крупных животных — нумерованными бляшками или кольцами.
  • Морских свинок можно маркировать зарисовкой уникального окраса.

6. Период наблюдения

Животные должны быть обеспечены полноценным питанием, доброкачественной питьевой водой, защищены от простуды и перезаражения.

Методика наблюдения зависит от цели эксперимента:

  • При определении вирулентности, токсигенности, токсичности через определённый срок учитывают гибель животных или появление инфильтратов.
  • При этиологической диагностике наблюдают за возникновением признаков заболевания (желтуха, кровоизлияния, параличи, повышение температуры, изменение поведения, потеря массы тела и др.), берут для бактериологического и серологического исследования кровь или другой материал (мочу, кал, выделения).

Забор материала у живых животных:

  • Кровь забирают с соблюдением асептики: у кроликов — из краевой вены уха или из сердца; у морских свинок — из сердца; у мышей — из венозного синуса внутреннего угла глаза или из вен хвоста.
  • Мочу и кал забирают, помещая мышей в большую стеклянную воронку с перфорированной пластинкой, а морских свинок и кроликов содержа в клетках с двойным дном и стоком.
  • Из конъюнктивы, носа, вагины, ран материал забирают бактериологической петлёй, из бубонов и инфильтратов — шприцем.

Материал засевают на питательные среды для выделения чистой культуры; кровь, кроме того, исследуют на содержание антител.

7. Вскрытие и посмертное исследование

В случае гибели животного или его умерщвления проводят микробиологическое исследование трупа. Вскрытие проводят как можно скорее в асептических условиях:

  • Мелких животных — в кюветах на парафиновой пластинке.
  • Крупных — на специальных операционных столиках.

Порядок вскрытия:

  1. Труп кладут на спину, лапы растягивают и фиксируют.
  2. Шерсть передней половины туловища обрабатывают дезинфектантом (избегая его попадания в пробы материала и на питательные среды!).
  3. Ножницами делают продольный разрез от подбородка до лобка и четыре поперечных разреза к лапкам. Кожу отсепаровывают скальпелем.
  4. Проводят либо полное протокольное вскрытие, либо избирательное — из органов, где локализуется патологический процесс (например, из лёгких).
  5. Для посева вырезают небольшие кусочки органов через прижжённую скальпелем поверхность, затем делают посев-отпечаток и мазок-отпечаток. Можно также сделать соскоб скальпелем или петлёй.
  6. Кровь забирают из сердца пастеровской пипеткой или шприцем.

Последовательность вскрытия полостей:

  • Череп: скальпируют кожу, обрабатывают дезинфектантом, ножницами срезают верхнюю половину черепной коробки.
  • Грудная полость: делают разрезы по хрящам вдоль грудной кости, откидывают её вверх, получая доступ к лёгким и сердцу.
  • Брюшная полость: пинцетом приподнимают брюшную стенку, осторожно делают продольный и поперечный разрезы ножницами, не повреждая кишечник.

После вскрытия:

  • Труп сжигают.
  • Инструменты дезинфицируют, очищают, стерилизуют.
  • Остальные предметы дезинфицируют и очищают.

См. также: Виварий, Животные лабораторные, Экспериментальный метод.