Питательные среды бактериологические

Питательные среды бактериологические — это жидкие, полужидкие или плотные субстраты, используемые для выращивания микроорганизмов в лабораторных или производственных условиях.

Назначение

Их применяют для:

Основные требования

Питательная среда должна:

  • Содержать в достаточном количестве неорганические соли, воду, источники углерода и азота, а в ряде случаев — ростовые факторы (витамины, аминокислоты).
  • Быть достаточно влажной, чтобы процесс простой диффузии питательных веществ проходил без затруднений.
  • Быть прозрачной для визуального или микроскопического наблюдения за ростом микробов.
  • Быть стерильной, чтобы точно знать, какому микроорганизму принадлежат наблюдаемые свойства.
  • Иметь оптимальные для целевой группы микробов концентрацию водородных ионов (pH) и окислительно-восстановительный потенциал.

Классификация по составу

  • Минеральные и органические среды.

  • Природные (натуральные): представляют собой природные субстраты — молоко, желчь, кровь, сыворотка, картофель.

  • Искусственные (полусинтетические): содержат смесь природных органических веществ и продуктов их кислотного или ферментативного распада.

  • Синтетические: состоят из забуференной солевой основы и растворов точно известных веществ — аминокислот, углеводов, пуринов, пиримидинов, нуклеотидов, нуклеозидов, жирных кислот, витаминов. Конкретный состав зависит от потребностей конкретного вида микроорганизмов.

Основные компоненты

Основой большинства искусственных органических сред являются:

Плотные и полужидкие среды готовят из жидких, добавляя уплотнитель, обычно агар, в концентрации 0.5 — 3%.

Классификация по назначению

  • Простые (общеупотребительные): например, мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ), пептонная вода.
  • Дифференциально-диагностические: плотные и жидкие pH-индикаторные, восстановительные, деполимеризующие и другие. Позволяют различить микроорганизмы по биохимическим свойствам.
  • Специальные (селективные или элективные): среды, на которых растут только или преимущественно определённые виды или группы видов. Подавляют рост сопутствующей микрофлоры.

Приготовление и контроль

Осветление и стерилизация

Прозрачность сред придают фильтрованием через ватно-марлевые, бумажные или тканевые (из миткаля, бальтинга) фильтры. Для осветления также используют:

  • Вспененный водный раствор (1:2) куриного белка (1 яйцо на 1 л среды).
  • 10 мл свежей сыворотки крови на 1 л среды. После добавления белка среду взбалтывают, кипятят 10 минут, корректируют pH, фильтруют через ватно-марлевый фильтр и стерилизуют.

Установление и корректировка pH

pH сред устанавливают с помощью индикаторов, колориметрическим или электрометрическим способом.

Колориметрический способ основан на изменении цвета растворов индикаторов в зависимости от концентрации водородных ионов. Часто pH определяют с помощью индикаторной шкалы Михаэлиса в компараторе Уолпола. Это колодка с шестью вертикальными каналами (диаметром с бактериологическую пробирку), расположенными в два ряда по три.

  1. В центральный канал переднего ряда помещают пробирку с 2 мл исследуемой среды, 4 мл дистиллированной воды и 1 мл индикатора (0.3% водный раствор метанитрофенола).
  2. В боковые каналы переднего ряда ставят пробирки с 2 мл среды и 5 мл дистиллированной воды (без индикатора).
  3. В крайние каналы заднего ряда вставляют пробирки со стандартными растворами с известным pH, между которыми предполагается значение pH среды.
  4. В средний канал заднего ряда помещают пробирку с дистиллированной водой (без индикатора). Наблюдение ведут через горизонтальную щель в проходящем свете. Реакция среды соответствует реакции того стандартного раствора, с которым она совпадает по цвету.

Для корректировки pH в крайние каналы ставят пробирки с требуемым стандартным раствором и средой с близким pH. Затем по каплям добавляют раствор щёлочи или кислоты до совпадения окраски со стандартом. Рассчитывают необходимое количество реагента для всего объёма среды, учитывая, что испытанию подвергалось 2 мл. Для более точного определения pH используют потенциометр согласно инструкции.

Контроль качества

Готовые среды подлежат обязательному контролю:

  • Биологический контроль: посев на среду типового штамма того вида микроорганизмов, для которого она предназначена.
  • Физико-химический контроль: проверка pH, оптической плотности и других свойств.
  • Контроль химического состава: проводится методами, указанными в соответствующем стандарте.

См. также: Стерилизация.