Бактериологический (культуральный) метод

Совокупность методик искусственного культивирования микроорганизмов на питательных средах. Применяется для их идентификации при диагностике инфекционных заболеваний или иных процессов, вызванных микробами, а также для определения ряда физиологических свойств культуры с другими целями — например, при выборе химиотерапевтического препарата.

Современные методы изучения большинства биологических свойств бактерий возможны только при наличии чистой культуры. Контаминация культуры другим видом микробов, как правило, ведёт к искажению результатов и неправильному заключению. Поэтому первая задача бактериологического метода — получение чистой культуры какого‑либо вида (вара) из микробной ассоциации и предупреждение контаминации посторонней микрофлорой материала для исследования и микробной культуры на всех этапах исследования. Это возможно при соблюдении стерильности:

  • забор материала в стерильных условиях в стерильную посуду;
  • посев материала на стерильные среды стерильным инструментом;
  • предупреждение попадания микробов из воздуха в процессе доставки, хранения и инкубации материала и засеянных питательных сред.

Вторая задача бактериологического метода — идентификация микробов выделенной чистой культуры, третья — определение дополнительных свойств, например, чувствительности к антибиотикам или вирулентности.

Этапы бактериологического метода

  1. Забор материала (см. «Материалы для исследования») и его доставка в бактериологическую лабораторию.
  2. Микроскопия исследуемого материала (см. «Бактериоскопический метод»). Этот этап часто не выполняется, хотя, несмотря на меньшую чувствительность, предварительная микроскопия в ряде случаев даёт ориентировочные сведения о возбудителе и позволяет выбрать необходимые для посева среды.
  3. Обработка исследуемого материала физическими или химическими факторами с целью удаления или уменьшения посторонней микрофлоры. Эта мера применяется, например, при исследовании мокроты, выделении кислотоустойчивых и спорообразующих микробов.
  4. Посев исследуемого материала (см. «Посевы бактериологические») на питательные среды для получения изолированных колоний.
  5. Инкубация засеянных питательных сред. Сроки и температура инкубации зависят от предполагаемой видовой принадлежности культуры. Обычно посевы выдерживают в термостате при 37 °C 1—2 дня. Если рост отсутствует, срок инкубации может быть продлён ещё на 2—3 дня. При более длительной инкубации необходимо предупредить высыхание среды, для чего посевы помещают в эксикатор с водой или пробки пробирок заливают парафином.
  6. Исследование колоний. Для изучения выбирают однородные изолированные колонии, располагающиеся далеко от краёв чашки и по штриху петли, окружают их чертой, нумеруют. Если исследование ведётся ненаправленно (полиэтиологичный процесс и прочее), то на основании результатов визуального осмотра выбирают по 2—3 колонии всех имеющихся на чашке типов и делают с них мазки.
  7. Пересев с выбранных колоний на среды накопления. Для этого с остатка колонии, в мазке которой выявлены однородные по форме и окраске бактерии, петлёй, стараясь не задеть соседние колонии, забирают часть культуры и засевают на скошенный в пробирке мясо‑пептонный агар (МПА) или специальную среду штрихом.
  8. Инкубация посевов в термостате до появления сплошного роста (обычно 1—2 дня).
  9. Определение чистоты выросшей на скошенных средах культуры путём макроскопического осмотра роста и микроскопии мазка из него.
  10. Идентификация выделенной чистой культуры и в случае необходимости (по требованию клинициста, эпидемиолога) определение различных биологических свойств.
  11. Заключение о видовой принадлежности выделенной культуры и её свойствах. Заключение даётся на официальном бланке со ссылкой на номер, под которым эта культура занесена в лабораторный журнал.

Значение и особенности метода

Бактериологический метод является основным в диагностике большинства бактериальных инфекций.

Преимущества:

  • Высокая чувствительность, позволяющая выделить из исследуемого материала чистую культуру, даже если в посевной дозе материала содержалось несколько десятков особей.
  • Высокая специфичность. Выделение того или иного вида бактерий из патологического материала при соблюдении ряда условий (см. «Возбудитель болезни») надёжно устанавливает этиологию патологического процесса. Исключение составляют условно‑патогенные аутохтонные для того или иного биотопа бактерии, для определения этиологической роли которых нужны специальные критерии, а также разграничение носительства и заболевания (например, дифтерийное носительство при стрептококковой ангине).
  • Ценность для практики. Метод позволяет установить свойства культуры, необходимые для назначения химио‑ и серотерапии, выявления источника инфекции и механизмов передачи возбудителя, выбора противоэпидемических мероприятий.
  • Относится к ранним методам диагностики.

Недостатки:

  • Опасность инфицирования персонала.
  • Сложность и трудоёмкость.
  • Длительность получения результата.

Достоверные данные о составе микрофлоры и её свойствах можно получить только при исследовании выборки из 3—10 культур.