Бактериоскопический (микроскопический) метод

Бактериоскопический, или микроскопический, метод — это совокупность способов обнаружения и изучения морфологических и тинкториальных свойств бактерий (микробов) в лабораторной культуре, патологическом материале или в пробах из внешней среды с помощью микроскопии.

Применение метода:

В лабораторной практике используют несколько типов микроскопических препаратов:

  1. Висячая капля.
  2. Придавленная капля.
  3. Тонкий мазок (крови, гноя, мокроты и другого материала).
  4. Толстая капля.
  5. Агар-микроскопия.
  6. Препарат-отпечаток.
  7. Фиксированный мазок.

В бактериологической практике чаще всего применяют последний тип — фиксированный мазок. Его приготовление состоит из нескольких этапов.

Этапы приготовления фиксированного мазка

  1. Забор и доставка материала для исследования.

  2. Приготовление препарата.

    • Исследуемый материал наносят на чистое, обезжиренное предметное стекло с помощью бактериологической петли и распределяют по площади примерно в 1 см².
    • Плотный (густой) материал или культуру с плотной питательной среды вносят петлёй в каплю физиологического раствора, тщательно размешивают и также распределяют по стеклу.
    • Количество вносимого материала зависит от предполагаемого числа бактерий в нём. Препарат должен быть таким, чтобы обеспечить хорошее прокрашивание и обесцвечивание всех бактерий и позволить наблюдать за единичными клетками.

  3. Высушивание мазка. Приготовленный мазок высушивают на открытом воздухе или в тёплой струе воздуха (например, от газовой горелки или фена).

  4. Фиксация препарата. Фиксация необходима для:

    • Обеспечения безопасности дальнейшей работы (убивает микроорганизмы).
    • Прочного прикрепления бактерий к стеклу.
    • Лучшего восприятия красителя, так как структуры убитых клеток окрашиваются легче и прочнее.

  5. Окрашивание мазка. Фиксированные мазки окрашивают одним из простых или специальных методов окраски (например, по Граму, Цилю — Нильсену). Мазок погружают в краситель или наливают его на препарат так, чтобы вся поверхность была покрыта. После окрашивания препарат тщательно просушивают на воздухе. Плохо высушенный мазок даёт мутное изображение при иммерсионной микроскопии из-за образования эмульсии.

  6. Микроскопия мазка.

Преимущества и недостатки метода

Ценность бактериоскопического метода состоит в его простоте, доступности и быстроте получения результатов (30 — 60 минут и менее).

Однако метод имеет существенные ограничения:

  • Низкая специфичность: из-за сходства морфологии разных видов бактерий.
  • Ограниченная чувствительность: метод позволяет обнаружить не менее 10⁵ бактерий в 1 мл.
  • Небольшой объём информации: результаты обычно носят ориентировочный характер и позволяют идентифицировать лишь высокие таксоны (например, род).

Ценность метода резко возрастает при исследовании простейших, грибов, а также при обработке препарата люминесцирующими сыворотками (см. Иммунофлюоресцентный метод).

Современный контекст

В современной лабораторной диагностике бактериоскопический метод остаётся важным экспресс-инструментом первого этапа исследования. Однако его роль сместилась в сторону предварительной, ориентировочной диагностики. Для точной идентификации видов и определения чувствительности к антибиотикам сегодня практически всегда используются культуральные (посев на среды) и молекулярно-генетические методы (например, ПЦР). Тем не менее, для некоторых инфекций (туберкулёз, малярия, гонорея) микроскопия по-прежнему является ключевым или обязательным методом диагностики. Современные цифровые микроскопы и системы анализа изображений позволяют частично автоматизировать процесс и улучшить воспроизводимость результатов.