Посевы бактериологические

Посевы бактериологические — это нанесение (внесение) петлёй, пипеткой или другим инструментом материала, содержащего бактерии, на поверхность или в толщу питательных сред. Цель — выделение чистой культуры, её накопление, хранение, а также определение количества и разнообразных свойств микроорганизмов (см. Бактериологический метод).

Посевы должны проводиться так, чтобы достичь поставленной цели (например, получения изолированных колоний) и одновременно предотвратить:

Проведение посевов требует:

  • Спецодежды.
  • Работы в специальных боксах и лабораториях с минимальным содержанием микробов.
  • Работы около пламени горелки.
  • Использования стерильных инструментов и сред.
  • Строгого соблюдения других условий асептики.

В зависимости от целей и материала посевы делают на плотные или жидкие среды, в чашки Петри, пробирки, колбы, матрацы, ферментёры и другие ёмкости.

Основные техники посева

Посев на чашки Петри бактериологической петлёй

  1. Петлю прокаливают на пламени и охлаждают.
  2. Берут каплю посевного материала.
  3. Левой рукой приоткрывают один край чашки.
  4. Вносят петлю внутрь и у одного из краёв круговыми движениями делают площадку.
  5. Засевают материал на всю поверхность среды параллельными штрихами с интервалом 4 — 5 мм.

Варианты:

  • При большом количестве микробов: материал засевают на половине чашки, петлю прожигают, чашку поворачивают на 90° и на оставшейся части проводят перпендикулярные штрихи, захватывая часть предыдущего посева.
  • Посев по секторам: чашку мысленно делят на 4 — 5 радиальных секторов и одной петлёй поочерёдно делают посевы на всех секторах.

Посев шпателем

  1. Берут 3 чашки с плотной средой.
  2. На середину первой петлёй или пипеткой вносят каплю материала и круговыми движениями шпателя или чашки производят сплошной посев.
  3. Этим же шпателем (без стерилизации) распределяют материал по второй и третьей чашкам.
  • Результат: позволяет получить изолированные колонии, но менее экономичен.

Посев тампоном

  • Первый вариант: тампоном, поворачивая его разными сторонами, проводят на чашке диагональную дорожку шириной 1 — 2 см, затем штрихами петли через дорожку засевают среду по обе её стороны.
  • Второй вариант: один радиальный сектор чашки засевают тампоном, а остальные секторы поочерёдно — петлёй с заходом каждый раз на уже обработанную тампоном поверхность.

Посев штампом-репликатором

  1. В лунки основания штампа-репликатора пипеткой наливают по 0.1 мл бульонных культур или смывов с агаровых культур.
  2. Крышку штампа накладывают на основание так, чтобы штыри окунулись в лунки с культурой.
  3. Делают отпечатки (реплики) на поверхности плотной среды одной или нескольких чашек.

Посев бляшкой

При определении некоторых свойств исследуемых культур бактерий (гемолиз, токсигенность, лецитиназная активность и др.) на плотных средах производят плотный посев на ограниченном участке в виде:

  • Прямоугольника.
  • Овала.
  • Круга размерами 0.5 — 0.8 × 1 — 1.5 см.

Между бляшками выдерживают расстояние в несколько сантиметров (в зависимости от теста).

Посев сплошным газоном

  1. Стерильной пипеткой в чашку со средой вносят 1 мл 1 — 2-миллиардной культуры.
  2. Осторожными круговыми движениями чашки покрывают культурой всю поверхность среды.
  3. Чашку слегка наклоняют и пипеткой отсасывают остатки культуры.
  • Применение: полученный сплошной газон подсушивают и используют, например, для нанесения типовых фагов.

Посев в пробирки со скошенной средой

Прямой посев исследуемого материала на скошенную среду делают редко (например, при выделении микобактерий). Чаще на скошенные среды переносят культуру из другой пробирки или с колоний на чашках.

Техника переноса:

  1. Обе пробирки держат в левой руке в наклонном положении (пробирка с засеянной средой ближе к туловищу) так, чтобы видеть поверхность среды.
  2. Петля — в правой руке.
  3. Пробки обеих пробирок вынимают, зажимая их между мизинцем и ладонью.
  4. Края пробирок обжигают, петлю прокаливают и охлаждают о стенку пробирки.
  5. Петлёй слегка касаются роста культуры на поверхности питательной среды.
  6. Переносят петлю, не касаясь стенок, во вторую пробирку и делают сплошной штриховой посев.
  7. Петлю прокаливают, ставят в штатив, края пробирок прокаливают и закрывают пробками.

Посев в конденсационную воду

  1. Выбирают свежескошенную среду с каплей конденсационной жидкости на дне.
  2. Исследуемую культуру забирают петлёй.
  3. Открывают пробку, обжигают края пробирки и петлю.
  4. Осторожно, не касаясь среды и стенок, вносят петлю в конденсационную воду.
  • Принцип: у подвижных культур рост бактерий с конденсационной воды распространяется на влажную поверхность косяка. С верхней части роста производят пересев в конденсационную воду второй пробирки и т.д.
  • Применение: позволяет получить чистую культуру подвижных бактерий, например, протея (способ Шукевича) или возбудителя столбняка (способ Файлдса).

Посев в верхнюю часть скошенной среды

Материал или культуру с соблюдением асептики наносят в виде бляшки на верхнюю часть свежескошенной среды. Пробирки помещают в термостат вертикально и наблюдают за сползанием культуры вниз по поверхности, что характерно для слизистых штаммов.

Посев в толщу плотной среды

  1. К 15 — 20 мл расплавленной и охлаждённой до 48 °C плотной питательной среды добавляют 1 мл исследуемого материала или культуры (одно или несколько разведений).
  2. Культуру и среду смешивают энергичными круговыми движениями флакона.
  3. Смесь выливают в стерильную чашку, распределяют ровным слоем и дают затвердеть на горизонтальной поверхности.
  4. Чашку помещают в термостат.
  • Результат: колонии вырастают в толще и на поверхности среды. Если среда прозрачная, их легко подсчитать.
  • Аналогично посев можно произвести в толщу столбика плотной среды в пробирке.

Посев уколом в столбик плотной или полужидкой среды

Используют:

Техника: бактериологической петлёй или иглой с посевным материалом делают прокол среды с поверхности до дна. Рекомендуется держать пробирку дном вверх, чтобы избежать контаминации воздушной микрофлорой.

Посев в жидкие среды

Посев в жидкие среды в пробирках или флаконах производят обычно стерильными пастеровскими или градуированными пипетками. В пробирки материал можно засевать и бактериологической петлёй.