Гемокультура

Гемокультура — это культура микроорганизмов, выделенная из крови пациента. Исследование на гемокультуру проводят в фазе бактериемии (при бактериальных инфекциях) или виремии (при вирусных инфекциях) для диагностики острых инфекционных заболеваний, таких как:

Поскольку микробы в крови обычно присутствуют в небольшом количестве, вероятность их выделения возрастает с увеличением объёма взятой для посева крови. Стандартно для анализа берут 5 — 15 мл крови.

Методика забора и посева:

  1. Время забора: Кровь предпочтительно брать в начале озноба, до начала или в перерыве антибиотикотерапии.
  2. Нейтрализация антимикробных агентов: Для устранения действия антибиотиков в питательную среду можно добавлять:
  3. Забор и хранение: Кровь забирают из вены в стерильных условиях. Её можно засеять на питательные среды сразу или позже. В последнем случае кровь стабилизируют, добавляя в пробирки гепарин, декстран сульфат или цитрат натрия в стандартных концентрациях.
  4. Соотношение среда/кровь: Чтобы преодолеть антимикробное действие сывороточных белков, кровь засевают в большие объёмы жидких питательных сред в соотношении 1:5 — 1:10.

Выбор сред и культивирование:

Выбор питательных сред зависит от предполагаемого возбудителя. При лихорадочных состояниях неясной этиологии кровь (5 — 10 мл) обычно засевают в колбы с 50 — 100 мл сахарного или сывороточного бульона и тиогликолевой среды (можно заменить средой Китта — Тароцци). Добавление 0.1 — 0.2% агара в жидкие среды повышает результативность выделения микроорганизмов.

Для выделения чистой культуры и её идентификации с жидких сред периодически делают высевы на специальные плотные среды. Однако частые высевы повышают риск контаминации (загрязнения) посторонней микрофлорой.

Метод Кастаньеды:

Для минимизации риска контаминации применяют метод Кастаньеды. Кровь засевают во флаконы, которые содержат не только жидкую питательную среду, но и слой плотного агара на одной или обеих стенках. После инкубации в течение 24 — 48 часов флакон наклоняют, чтобы жидкая культура смочила агаровый слой, и снова помещают в термостат. Если на агаре появляются колонии, с них делают пересев для идентификации. При отсутствии роста процедуру смачивания повторяют.

Интерпретация результатов:

Оценка результатов посева крови неоднозначна и требует клинического анализа:

См. также: Бактериемия.

Современный контекст

Современная микробиологическая диагностика сепсиса и бактериемий значительно усовершенствовалась. Наряду с классическим методом Кастаньеды, широко используются:

  1. Автоматизированные системы для культивирования крови (например, BACTEC, BacT/ALERT). Они непрерывно мониторят рост микроорганизмов по выделению CO₂ или потреблению кислорода, что значительно ускоряет получение результата (до 24 — 48 часов для большинства патогенов).
  2. Молекулярно-генетические методы (ПЦР в реальном времени, секвенирование). Позволяют напрямую детектировать ДНК или РНК возбудителей в крови, минуя длительный этап культивирования. Это особенно критично для медленно растущих или труднокультивируемых микроорганизмов.
  3. Масс-спектрометрия (MALDI-TOF). Позволяет быстро (в течение минут) идентифицировать микроорганизм по белковому профилю непосредственно из выросшей колонии или даже из положительной гемокультуры.
  4. Стандартизация объёма забора. Согласно современным рекомендациям, для взрослых оптимальным считается забор 20 — 30 мл крови за одну процедуру, разделённой на 2 — 4 флакона (аэробный и анаэробный), что существенно повышает чувствительность метода.