Никотинамидазный тест

Никотинамидазный тест — это микробиологическая проба, определяющая способность микобактерий продуцировать фермент никотинамидазу. Этот фермент расщепляет никотинамид с образованием аммиака, что и служит основой для детекции.

Методика проведения (качественное определение по Катэ)

Для постановки теста готовят специальную агаровую среду.

Состав среды (на 1 литр дистиллированной воды):

• Пептон — 1 г
• Агар — 20 г
• Хлорид натрия (NaCl) — 5 г
• Дигидрофосфат калия (KH₂PO₄) — 2 г
• Глюкоза — 1 г
• Глицерин — 10 мл

Приготовление и проведение теста:

1. Устанавливают pH среды на уровне 6,9.
2. Среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют в автоклаве в течение 30 минут при температуре 120 °C.
3. Пробирки скашивают для получения скошенной поверхности агара.
4. На поверхность среды наносят 0,25 мл стерильного 3% раствора никотинамида (раствор стерилизуют при 100 °C в течение 30 минут) и оставляют на 2–3 дня для полного впитывания.
5. На подготовленную среду засевают 0,2 мл взвеси исследуемой культуры микобактерий с концентрацией 1 мг/мл.
6. Пробирки инкубируют до появления видимого роста культуры (обычно 2–3 недели).
7. После инкубации в пробирку добавляют 0,5 мл реактива Несслера для выявления аммиака.

Интерпретация результатов:

• Положительный результат: Появление ржавого или жёлто-коричневого окрашивания среды, свидетельствующее о выделении аммиака.
• Отрицательный результат: Отсутствие окрашивания.
• Контроль: Обязательно ставят контрольную пробирку со средой без никотинамида. В ней окрашивания быть не должно.

Примечание: По аналогичной методике можно определять активность и других амидаз, используя соответствующие субстраты:

• Ацетамидаза (4% раствор ацетамида)
• Уреаза (4% раствор мочевины)
• Пиразинамидаза (2% раствор пиразинамида)

Количественное определение

Для количественной оценки активности никотинамидазы применяют методику по Венике.

См. также: Mycobacterium