Реакция нейтрализации (РН)

Реакция нейтрализации (РН) — это лабораторный тест, в котором антитела иммунной сыворотки нейтрализуют, обезвреживают или тормозят биологическую активность (летальную, инфекционную, токсическую, ферментативную и другую) микроорганизмов, их токсинов и ферментов.

РН применяют в нескольких основных вариантах:

1. Определение и идентификация микроорганизмов

Цель — качественное и количественное определение возбудителя.

  • Методика: Стандартную иммунную сыворотку (в одной или нескольких дозах) смешивают с биологическим материалом или взвесью исследуемой культуры. Смесь инкубируют в термостате или при комнатной температуре определённое время, после чего вводят в тест-систему.
  • Тест-системы: Восприимчивые лабораторные животные, куриные эмбрионы (КЭ) или культуры клеток.
  • Интерпретация: Отсутствие биологического эффекта (например, гибели животного) в опыте при его наличии в контроле (смесь исследуемого агента с нормальной сывороткой) свидетельствует о гомологии между исследуемым агентом и известным, против которого направлена сыворотка.
  • Количественный вариант: Вычисляют индекс нейтрализации — отношение средней летальной дозы (ДЛ₅₀) в опыте к ДЛ₅₀ в контроле.
  • Определение титра антител: Вариант этой методики используют для установления титра антител в биологических жидкостях (например, при серологической диагностике инфекционных заболеваний). В этом случае необходим стандартный лабораторный штамм микроорганизма. Техника постановки реакции варьирует в зависимости от инфекционного агента и выбранной тест-системы.

2. Определение токсина или антитоксина

Цель — количественное и качественное определение токсина или уровня антитоксических антител.

  • Метод in vitro: Исследуемый субстрат или стандартный токсин смешивают с разведениями стандартной или исследуемой антитоксической сыворотки. Смесь инкубируют в термостате 30–60 минут и вводят животным. Эффект сравнивают с контролем.
  • Количественный тест: При титровании антитоксических сывороток устанавливают индекс нейтрализации.
  • Метод in vivo: Людям с постинфекционным иммунитетом или активно/пассивно иммунизированным животным вводят заранее оттитрованную дозу токсина. Через 1–5 суток результаты сравнивают с контролем (интактные животные того же вида и массы). При необходимости вычисляют индекс нейтрализации.
  • Применение: Определение токсигенности возбудителей, присутствия токсина в биологических жидкостях (например, при ботулизме), а также для изучения уровня антитоксического иммунитета (см. реакции Шика и Дика).

3. Нейтрализация бактериальных ферментов

Цель — установление продукции фермента бактериями или определение титра антиферментных антител в сыворотке крови больного.

  • Пример — проба Наглера: Сыворотку, содержащую известные антитела, добавляют в питательную среду с субстратом и засевают исследуемую культуру. Расщепление субстрата в контроле и отсутствие его в опыте указывают на продукцию бактерией конкретного фермента.
  • Определение антиферментов: Сыворотку больного разводят, добавляют к разведениям оттитрованную дозу стандартного фермента, инкубируют и вносят в специфический субстрат. Устанавливают титр — наибольшее разведение сыворотки, тормозящее расщепление субстрата.
  • Диагностическое значение: Как правило, имеет значение нарастание титра антител в парных сыворотках, взятых с интервалом.

Современный контекст

Реакция нейтрализации остаётся «золотым стандартом» для оценки функциональной активности антител, особенно вирус-нейтрализующих. Широко используется в вирусологии для: