Ниациновый тест

Ниациновый тест — это биохимическая проба для обнаружения никотиновой кислоты (ниацина) в экстракте культуры микобактерий. Тест положителен для Mycobacterium tuberculosis и отрицателен для большинства других видов этого рода, что позволяет использовать его для дифференциальной диагностики.

Принцип и классическая методика

В основе теста лежит цветная реакция на ниацин. Для её проведения к культуре микобактерий в жидкой среде или смыву с плотной питательной среды добавляют:

• 1 мл 10% водного раствора цианида калия,
• 1 мл 5% раствора хлорамина.

При наличии ниацина через несколько минут появляется ярко-жёлтое окрашивание. В качестве альтернативных реагентов можно использовать цианид брома вместо цианида калия и 4% раствор анилина вместо хлорамина.

Метод с индикаторными бумажками

В последнее время получил распространение упрощённый метод с использованием готовых индикаторных полосок.

Изготовление полосок:

На полоски фильтровальной бумаги размером 100 × 8 мм последовательно наносят капли свежеприготовленных растворов:

1. 20% ПАСК (пара-аминосалициловая кислота) — на отмеченный карандашом конец.
2. 60% роданида калия — на середину полоски.
3. 50% хлорамина Б — на неотмеченный конец.

Между смоченными участками оставляют сухие промежутки. Полоски высушивают и хранят в холодильнике.

Проведение теста:

1. Готовят водный экстракт исследуемой культуры микобактерий, добавляя в пробирку с ростом 1–1,5 мл дистиллированной воды и выдерживая её в наклонном положении в термостате 2–3 часа.
2. В пробирку с 0,6 мл полученного экстракта опускают индикаторную бумажку отмеченным концом вниз.
3. Пробирку закрывают резиновой пробкой и аккуратно покачивают до полного пропитывания полоски экстрактом.
4. В положительном случае через 15–20 минут экстракт окрашивается в ярко-жёлтый цвет.

Меры предосторожности: После учёта результатов пробы токсичные реагенты необходимо обезвредить: цианид — автоклавированием с гидроксидом калия, роданид — добавлением водного раствора аммиака.

Современный контекст

Ниациновый тест долгое время был одним из основных методов дифференциации M. tuberculosis в лабораторной практике. Однако в современных лабораториях его использование сократилось в связи с появлением более быстрых, безопасных (не требующих работы с цианидами) и точных молекулярно-генетических методов, таких как ПЦР в реальном времени и секвенирование. Эти методы позволяют не только идентифицировать вид микобактерии, но и выявлять генетические маркёры лекарственной устойчивости. Тем не менее, ниациновый тест может оставаться полезным в условиях ограниченных ресурсов или как дополнительный метод в комплексе исследований.