Иммуноферментный метод

Иммуноферментный метод (ИФА) — это лабораторный способ определения антигенов (Аг) или антител (Ат) с помощью антител или антигенов, которые ковалентно соединены с ферментом. Чаще всего в качестве метки используют пероксидазу хрена, реже — β-глюкуронидазу, щелочную и кислую фосфатазы.

Принцип метода основан на следующем:

1. Образовавшийся специфический иммунный комплекс (антиген-антитело) содержит ферментную метку.
2. При добавлении специального бесцветного субстрата фермент расщепляет его, что приводит к образованию окрашенного продукта.
3. Интенсивность окраски, которую измеряют фотометрически (по оптической плотности), прямо пропорциональна количеству искомого вещества (антигена или антитела) в пробе.

Основные характеристики метода:

• Высокая специфичность и чувствительность.

• Возможность автоматизации благодаря использованию стандартных тест-систем и специальных анализаторов.

Разновидности метода:

• Прямой ИФА: ферментом метят непосредственно специфические антитела, которые взаимодействуют с искомым антигеном.
• Непрямой (сендвич) ИФА: для выявления иммунного комплекса используют вторичные антитела (антииммуноглобулины), меченные ферментом. Этот вариант часто повышает чувствительность анализа.

Области применения:

В настоящее время иммуноферментный метод широко применяется для:

• Серологической диагностики инфекционных болезней: ВИЧ-инфекции (СПИДа), вирусных гепатитов, хламидиоза, токсоплазмоза и многих других.

• Определения уровня гормонов (например, тиреотропного гормона, инсулина).

• Измерения концентрации компонентов системы комплемента.

• Количественного определения иммуноглобулинов, в частности общего и специфического IgE (что важно для диагностики аллергий).