Предложены первые стратегии валидации специфичности антител

Международная рабочая группа по валидации антител (IWGAV), независимая группа международных ученых, опубликовала в Nature Methods первоначальные стратегии для решения критической неудовлетворенной потребности в специфичности, функциональности и воспроизводимости антител. IWGAV — это первая инициатива такого масштаба, устанавливающая стратегические рекомендации по валидации антител как для производителей, так и для пользователей.

Хотя антитела — одни из самых часто используемых инструментов в научных исследованиях, до сих пор не существует всеобъемлющей научной основы для валидации их специфичности в различных приложениях. Использование плохо охарактеризованных антител, по оценкам, обходится в $350 миллионов ежегодно только в США и $800 миллионов по всему миру из-за неудачных или ненадежных экспериментов.

IWGAV определила пять "концептуальных столпов" для руководства валидацией антител в конкретных исследовательских приложениях:

• Генетические стратегии: Измерение соответствующего сигнала в контрольных клетках или тканях, в которых ген-мишень был нокаутирован или нокдаунирован с помощью таких методов, как CRISPR/Cas или RNAi.
• Ортогональные стратегии: Использование независимого от антител метода для количественного анализа множества образцов с последующим изучением корреляции между результатами, полученными с антителами и без них.
• Стратегии с независимыми антителами: Использование двух или более независимых антител, распознающих разные эпитопы на белке-мишени, и подтверждение специфичности с помощью сравнительного и количественного анализа.
• Экспрессия меченых белков: Модификация эндогенного гена-мишени для добавления последовательностей аффинного тега или флуоресцентного белка. Сигнал от меченого белка можно соотнести с детекцией с помощью методов на основе антител.
• Иммуноаффинное выделение с последующей масс-спектрометрией (MS): Сочетание иммуноаффинного выделения (техники изоляции белка из раствора через связывание со специфичным антителом) с MS-анализом для идентификации белков, напрямую взаимодействующих с очищенным антителом, а также белков, которые могут образовывать комплекс с белком-мишенью.

Хотя каждый из этих концептуальных столпов может служить доказательством специфичности антител, IWGAV рекомендует использовать несколько столпов для утверждения, что конкретное антитело хорошо валидировано для определенного применения. В публикации также содержатся рекомендации для производителей и пользователей по обеспечению воспроизводимости антител с течением времени.

Предложение, опубликованное в Nature Methods, призвано заложить научную основу для стандартов валидации и воспроизводимости антител, способствующих широкому внедрению всеобъемлющих руководств по их использованию.