Комплемента потребления реакция

Комплемента потребления реакция (реакция связывания комплемента, РСК) — иммунологический метод, суть которого заключается в том, что при добавлении специфического антигена к свежей сыворотке крови, содержащей антитела, активность комплемента в этой сыворотке снижается. Это происходит в результате «потребления» (связывания) комплемента образовавшимся комплексом антиген–антитело.

Методика постановки реакции

Для проведения реакции к 0,5 мл свежей сыворотки пациента добавляют рабочую дозу раствора антигена в объёме 0,1 мл. Параллельно ставят контрольные пробы:

  • Контроль сыворотки: к 0,5 мл сыворотки добавляют 0,1 мл физиологического раствора вместо антигена.
  • Контроль антигена: к 0,5 мл физиологического раствора вместо сыворотки добавляют 0,1 мл раствора антигена.

Все пробирки инкубируют в течение 1 часа при температуре 37 °C. После инкубации содержимое каждой пробирки разводят физиологическим раствором в 20 раз.

Определение активности комплемента (титра)

Для определения разницы в титре (активности) комплемента в опытных и контрольных пробах используют гемолитическую систему:

  1. Из каждой разведённой пробы отбирают ряд нарастающих объёмов (например, от 0,05 до 0,95 мл).
  2. Объём в каждой пробирке доводят физиологическим раствором до 1 мл.
  3. Во все пробирки добавляют по 0,25 мл сенсибилизированной гемолитической системы (эритроциты барана, обработанные специфическими антителами).
  4. Пробирки инкубируют в термостате 15 минут при 37 °C.

Оценка результата

Реакцию оценивают по степени гемолиза (разрушения эритроцитов) в опытной пробе по сравнению с контролем:

  • Слабоположительная: гемолиз в опытной пробирке выше на 2 дозы (две пробирки в ряду разведений).
  • Положительная: разница составляет 3 дозы.
  • Резко положительная: разница более 3 доз.

Отсутствие разницы или незначительная разница (1 доза) свидетельствует об отрицательном результате, то есть об отсутствии в сыворотке пациента специфических антител к исследуемому антигену.

Современный контекст

Реакция связывания комплемента (РСК) была одним из основных серологических методов диагностики инфекционных заболеваний (сифилиса, риккетсиозов, некоторых вирусных инфекций) на протяжении большей части XX века. В современной лабораторной диагностике классическая РСК используется редко, так как она трудоёмка, требует строгой стандартизации компонентов и занимает много времени (около двух суток).

Её в значительной степени заменили более чувствительные, специфичные и быстрые методы:

  • Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA) для обнаружения антител или антигенов.

  • Реакция иммунофлуоресценции (РИФ).

  • Иммуноблот (Вестерн-блот) для подтверждения результатов.

  • Методы молекулярной диагностики (ПЦР) для прямого обнаружения генетического материала возбудителя.

Тем не менее, принцип связывания комплемента лежит в основе некоторых современных модифицированных тестов, а историческое значение РСК для развития иммунологии и серодиагностики остаётся огромным.