Реакция связывания комплемента (РСК)

Реакция связывания комплемента (РСК) — это серологическая реакция, используемая для количественного определения комплементсвязывающих антител и антигенов.

Принцип реакции основан на том, что специфический иммунный комплекс (антиген + антитело) полностью или частично адсорбирует (связывает) добавленный в систему комплемент. В качестве количественного индикатора этого связывания используют гемолитическую систему. Её гемолиз указывает на отсутствие иммунного комплекса в диагностической смеси (отрицательная РСК), а задержка гемолиза — на его присутствие (положительная РСК).

Компоненты для постановки РСК

В реакции применяют пять основных компонентов:

  1. Исследуемая сыворотка. Её прогревают при 57 °C в течение 30 минут. Сыворотка должна быть свежей, без взвешенных частиц, цитотоксинов и комплемента. В опыт обычно берут несколько разведений сыворотки, кратных двум, в зависимости от ожидаемого диагностического титра при предполагаемом заболевании.
  2. Диагностикум. Готовый коммерческий или специально приготовленный для РСК антиген.
  3. Комплемент в рабочей дозе. Его титр при титровании с антигеном должен быть равен титру комплемента, а при титровании без антигена — превышать его на 20–25%.
  4. Эритроциты барана. Их несколько раз отмывают физиологическим раствором и готовят 3% взвесь.
  5. Гемолитическая сыворотка (антитела к эритроцитам барана). Её разводят в 3 раза меньше титра, указанного на этикетке.

Все пять компонентов берут в одинаковом объёме (0,5 мл или 0,25 мл).

Ход постановки реакции и контроли

В опытную (диагностическую) систему вносят исследуемую сыворотку, диагностикум (антиген) и комплемент.

Обязательно готовят контрольные пробирки:

  • Контроль сыворотки: сыворотка, комплемент и физраствор (вместо антигена).
  • Контроль антигена: диагностикум, комплемент и физраствор (вместо сыворотки).
  • Контроль комплемента: комплемент и двойной объём физраствора.
  • Заведомо положительный контроль: стандартная иммунная сыворотка, антиген, комплемент.
  • Заведомо отрицательный контроль: нормальная сыворотка, антиген, комплемент.

Пробирки встряхивают и помещают в термостат при 37 °C на 45 минут.

Одновременно готовят гемолитическую систему, смешивая равные объёмы 3% взвеси эритроцитов барана и гемолитической сыворотки, и инкубируют её в термостате такое же время.

После инкубации во все опытные и контрольные пробирки добавляют двойной объём гемолитической системы (1 мл или 0,5 мл). Все пробирки снова выдерживают в термостате при 37 °C до появления полного гемолиза в контрольных пробирках (около 30–40 минут).

Учёт и оценка результатов

  • Количественный способ: находят то разведение сыворотки, в котором наблюдается задержка гемолиза не менее чем на «2+». Это разведение считается титром антител в исследуемой сыворотке, который затем сравнивают с диагностическим титром для распознаваемой болезни.
  • Полуколичественный способ: используют одно разведение сыворотки (обычно 1:5) и оценивают степень задержки гемолиза (4+, 3+, 2+), что позволяет судить об интенсивности реакции.
  • Более точные результаты даёт определение титра сыворотки не по 100%, а по 50% гемолизу (см. «Определение комплемента»).

Также предложен вариант количественной постановки РСК, в котором берут одно разведение сыворотки, но несколько доз комплемента (1; 1,5; 2; 2,5; 3; 4). Остальные компоненты используют в стандартных количествах. При оценке учитывают, что чем больше доз комплемента связывает исследуемая сыворотка, тем выше в ней содержание антител.

Современный контекст

Реакция связывания комплемента (РСК) была одним из основных серологических методов диагностики инфекционных заболеваний (сифилиса, вирусных инфекций, риккетсиозов) на протяжении большей части XX века. В современной лабораторной диагностике её применение значительно сократилось. Метод считается трудоёмким, длительным и менее специфичным по сравнению с новыми технологиями.

Сегодня для обнаружения антител и антигенов преимущественно используют:

  • Иммуноферментный анализ (ИФА, ELISA) — более чувствительный, автоматизированный и позволяющий работать с большим количеством образцов.

  • Иммунохемилюминесцентный анализ (ИХЛА).

  • Методы иммуноблоттинга для подтверждения результатов.

РСК может сохранять значение в некоторых специализированных лабораториях для диагностики отдельных заболеваний или в научно-исследовательской работе, но в рутинной клинической практике она практически вытеснена более современными методами.