Индикаторы Eh

Индикаторы Eh — это химические вещества, изменяющие окраску при изменении окислительно-восстановительного потенциала среды. В микробиологии их применяют для:

Типы индикаторов и методы применения

Индикаторы дегидрогеназного типа

Используются для определения активности дегидрогеназ — ферментов, отщепляющих водород от окисляемых субстратов. В качестве индикаторов применяют:

  • 1% водный раствор метиленового синего;
  • лакмусовую настойку;
  • 5% водный раствор индигокармина. Обычно добавляют по 1 капле одного из этих растворов на 5 мл питательной среды. Также используют малахитовую зелёнь в конечной концентрации 0,01%.

Техника постановки реакции

Чтобы предотвратить окисление восстановленной (бесцветной) формы красителя кислородом воздуха, среду после посева заливают стерильным парафиновым маслом или делают посев уколом в столбик плотной среды, содержащей индикатор. Восстановление красителя (исчезновение окраски) свидетельствует о наличии дегидрогеназной активности.

Индикаторы для определения оксидаз

Для выявления фермента цитохромоксидазы применяют 0.5–1% раствор диметилпарафенилендиамина хлорида. Реакцию проводят двумя способами:

  1. Нанесение раствора непосредственно на поверхность исследуемой колонии.
  2. Нанесение петлёй культуры штрихами на фильтровальную бумагу, смоченную этим раствором. При наличии оксидазной активности колония или штрих окрашивается в тёмно-синий цвет в течение 1–3 минут.

Применение солей тетразолия

Растворы 2, 3, 5-трифенилтетразолийхлорида (ТТХ) широко используются благодаря своей высокой чувствительности. Бесцветный ТТХ, поглощаясь живыми клетками, восстанавливается дегидрогеназами до нерастворимого красного формазана. Это свойство применяют для:

  • дифференциации живых бактерий от убитых (окрашиваются только живые);
  • ускоренного определения чувствительности микробов к антибиотикам (отсутствие окраски в зоне действия эффективного антибиотика);
  • определения степени бактериальной обсеменённости молока.