Блоттинг

Блоттинг (от англ. blotting — «получение реплики пятен») — метод иммунохимического анализа и идентификации полипептидов, фрагментов ДНК, РНК, белков и других биомолекул.

Принцип метода:

1. Биомолекулы (например, белки или фрагменты ДНК), предварительно разделённые с помощью электрофореза в геле, переносят на специальную микропористую мембрану (фильтр).
2. Перенос осуществляется таким образом, что расположение молекул на мембране полностью повторяет картину электрофореграммы, создавая её точную копию («отпечаток»).

Способы переноса:

• Капиллярный (метод Саузерна): буферный раствор поднимается от геля к мембране за счёт капиллярных сил, увлекая за собой разделённые молекулы.
• Электронный (вестерн-блоттинг): молекулы переносятся на мембрану под действием электрического поля.

Анализ: После переноса полученные копии обрабатывают специфическими диагностическими реагентами. Например, для выявления белков (антигенов) мембрану обрабатывают антителами, меченными ферментом или флуорохромом, аналогично иммуноферментному анализу (ИФА).

Применение: Метод блоттинга широко используется в молекулярной биологии и биохимии, в частности для анализа фрагментов нуклеиновых кислот (ДНК, РНК) с помощью гибридизации, а также для детекции специфических белков.