Реакция торможения гемагглютинации

Серологическая реакция, основанная на подавлении (торможении) процесса агглютинации (склеивания) эритроцитов. Применяют два основных вида этой реакции:

  1. Реакция торможения активной гемагглютинации (РТГА) — используется для серодиагностики вирусных инфекций и определения типа неизвестного вируса.
  2. Реакция торможения пассивной гемагглютинации (РТПГА) — применяется для обнаружения антигенов (или гаптенов) бактериального, грибкового или протозойного происхождения в исследуемом материале. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью, но технически более трудоёмка.

Принцип и проведение РТГА

Для серодиагностики (определения антител в сыворотке крови пациента):

  • Берут две серии двукратных разведений сыворотки крови больного — одну, взятую в начале болезни, и вторую, взятую через 10–14 дней (по 0,25 мл каждого разведения).
  • К каждому разведению добавляют по 0,25 мл стандартного вирусного диагностикума (известный антиген).
  • Смесь инкубируют в течение часа при комнатной температуре.
  • Затем в каждую пробирку (или лунку планшета) вносят по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов.
  • Через 30–60 минут оценивают результат в обоих рядах (с ранней и поздней сывороткой). Определяют последние разведения сыворотки, в которых наблюдается торможение (то есть отсутствие) гемагглютинации.
  • Интерпретация: Если титр антител в поздней сыворотке вырос в 4 раза и более по сравнению с ранней, реакция считается положительной (подтверждает текущую инфекцию). В остальных случаях — отрицательной.

Для типирования вирусов (определения типа неизвестного вируса):

  • Готовят серии двукратных разведений стандартной типовой иммунной сыворотки (по 0,25 мл).
  • К каждому разведению добавляют равный объём (0,25 мл) исследуемой вирусной суспензии, содержащей 4 гемагглютинирующие единицы (дозы).
  • После часовой инкубации при комнатной температуре добавляют по 0,5 мл 1% взвеси куриных эритроцитов.
  • Учёт проводят аналогично. Вирус признают идентичным типу стандартной сыворотки, если титр РТГА с исследуемым вирусом достигает титра или половины титра этой стандартной сыворотки.

Контроли: В обоих вариантах РТГА обязательно ставят три контрольные пробы: контроль сыворотки, контроль вируса (антигена) и контроль эритроцитов.

Принцип и проведение РТПГА

Реакцию проводят в два этапа:

  1. К серии двукратных разведений исследуемого материала (где предполагается наличие антигена) добавляют равный объём (обычно 0,25 мл) стандартной иммунной сыворотки, взятой в заранее определённой рабочей дозе.
  2. Пробирки инкубируют в термостате 2 часа. Если в материале присутствует антиген, специфичный для добавленной сыворотки, происходит связывание антител.
  3. Затем добавляют эритроцитарный диагностикум — эритроциты, на поверхности которых адсорбирован известный антиген. В тех пробирках, где антитела сыворотки уже связались с антигеном из исследуемого материала, они не могут агглютинировать сенсибилизированные эритроциты. Наблюдается торможение агглютинации.
  4. Степень торможения зависит от количества антигена в материале.

Контроли: Опыт сопровождают контролями сыворотки, эритроцитарного диагностикума и исследуемого материала.

Современный контекст

Реакция торможения гемагглютинации, особенно РТГА, долгое время была «золотым стандартом» в вирусологии для серодиагностики таких инфекций, как грипп, корь, краснуха, арбовирусные инфекции. В настоящее время во многих лабораториях её вытеснили более современные, автоматизированные и менее трудоёмкие методы:

Однако РТГА и РТПГА сохраняют своё значение в качестве референс-методов, для исследований в полевых условиях, а также в работе с некоторыми специфичными возбудителями, где альтернативные тесты менее доступны или недостаточно стандартизированы.