CRISPR/Cas9 использовали для имитации митотической рекомбинации в целях картирования генов

Исследователи из Калифорнийского университета разработали метод использования системы CRISPR/Cas9 для имитации митотической рекомбинации в дрожжевых клетках. Это открывает новый способ картирования генов и определения их функций. Работа опубликована в журнале Science.

• Проблема традиционных методов: Ранее определение функций отдельных генов было медленным и сложным процессом, основанным на поиске естественной мейотической рекомбинации. Этот подход требовал анализа огромного числа потомков и не всегда давал искомые результаты.

• Суть нового метода: Исследователи использовали CRISPR/Cas9 для целенаправленного создания двуцепочечных разрывов в хромосомах на стадии перед делением клетки (митоз). Это имитирует редкий естественный процесс.

• Механизм: Клетка ремонтирует разрыв с помощью гомологичной рекомбинации, используя в качестве матрицы вторую хромосому. Иногда это приводит к потере одного аллеля и образованию гомозиготного участка. Потеря функции из-за отсутствия гена позволяет определить его роль.

• Контроль: Метод позволяет вызывать такие разрывы по требованию в нужное время и в нужном месте, что дает контроль над процессом.

• Подтверждение работы: Технику успешно протестировали на дрожжах, чувствительных к марганцу, отбирая нефлуоресцентные клетки. Это показало, что метод работает и позволяет связывать генотипы с конкретными локусами.

Разработка прокладывает путь к новому подходу в функциональном картировании генов.