Гель-хроматография, гель-фильтрация

Способ разделения смесей веществ по размеру и массе их молекул с использованием специальных пористых материалов — так называемых молекулярных сит (например, сефадексов).

Принцип метода

Метод основан на различии в скорости прохождения молекул через колонку, заполненную гранулами геля. Молекулы, размер которых превышает диаметр пор геля, не проникают внутрь гранул и быстро элюируются (вымываются) с колонки. Меньшие молекулы способны проникать в поры, их путь удлиняется, и они выходят из колонки позже. Таким образом, разделение происходит в порядке убывания молекулярной массы.

Ключевые компоненты

• Неподвижная фаза: Гранулированный гель (например, сефадекс, агароза, полиакриламид) с определённым размером пор.
• Подвижная фаза (элюент): Буферный раствор, который пропускают через колонку.

Основные области применения

• Очистка и фракционирование белков, ферментов, нуклеиновых кислот, полисахаридов.
• Определение молекулярной массы биополимеров.
• Обессоливание растворов макромолекул.
• Анализ синтетических полимеров.

Современный контекст

Термин «гель-фильтрация» чаще используется в биохимии для работы с водными растворами, в то время как «гель-проникающая хроматография» (GPC — Gel Permeation Chromatography) применяется в анализе синтетических полимеров в органических растворителях. Современные носители (например, сефарозы с различной степенью сшивки, высокоэффективные силикагели) обладают улучшенной механической стабильностью и позволяют проводить разделение под давлением в системах высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ/НРLC).