Счётная камера

Счётная камера — это прибор, используемый для подсчёта количества клеток в суспензии (например, бактериальной или дрожжевой). Она представляет собой толстое предметное стекло с прямоугольным углублением (камерой). В центре этого углубления находится выступающая площадка, на которую нанесена микроскопическая сетка.

Ключевые параметры камеры:

  • Площадка разделена на 400 маленьких квадратов, каждый площадью 0,0025 мм².
  • Общая площадь сетки (центральной площадки) составляет 1 мм².
  • Расстояние между поверхностью площадки и покровным стеклом, которое на неё кладут, строго фиксировано и равно 0,02 мм. Это создаёт точный, известный объём над каждым квадратом сетки.

Методика работы:

  1. Исследуемую суспензию аккуратно вносят пастеровской пипеткой на центральную площадку.
  2. Сверху накрывают специальным покровным стеклом, которое за счёт своей конструкции обеспечивает нужную высоту камеры.
  3. Камеру помещают под микроскоп и подсчитывают количество клеток в определённом количестве квадратов.
  4. На основе известной площади и высоты рассчитывают среднюю концентрацию клеток в одном квадрате, а затем пересчитывают её на 1 мл исходной суспензии.

Определение доли живых клеток (метод витального окрашивания):

Для дифференциации живых и мёртвых клеток к суспензии перед подсчётом можно добавить специальный краситель, например, 0,001% раствор нейтрального красного. Принцип основан на разной проницаемости мембран: живые клетки не пропускают краситель или окрашиваются в один цвет, а мёртвые с повреждённой мембраной — в другой, что позволяет их различить под микроскопом.

Современный контекст

Хотя счётные камеры (например, камеры Горяева, Тома, Фукса-Розенталя) до сих пор используются в лабораториях для прямого подсчёта дрожжей, спор, некоторых крупных клеток и проверки других методов, для подсчёта бактерий они применяются реже из-за их малых размеров и трудоёмкости процесса.

Сегодня для быстрого и точного определения концентрации и жизнеспособности клеток широко используются автоматические анализаторы:

  • Проточные цитометры: Пропускают клетки по одной через лазерный луч, анализируя их размер, гранулярность и флуоресценцию (например, после окрашивания флуоресцентными красителями, специфичными для живых/мёртвых клеток).
  • Счётчики частиц (кулетеры): Измеряют изменение электрического сопротивления при прохождении клетки через маленькое отверстие.

Эти методы позволяют анализировать тысячи клеток в секунду и предоставляют гораздо более подробную статистику о популяции.