Новый метод окрашивания тубулина в инфузориях: просто, эффективно, универсально

Инфузории — одноклеточные эукариоты с ресничками — изучаются с начала эпохи световой микроскопии, и описано уже более 10 000 видов. Реснички (цилии) — их ключевая особенность, определяющая разнообразие: они различаются по длине, покрывают всю клетку или её части, могут объединяться в пучки (цирры). Окрашивание ресничек и базальных телец — стандартная процедура в морфологии инфузорий, для которой используют методы импрегнации серебром или иммунофлуоресценции с антителами к тубулину.

Живо-клеточные красители тубулина, распространённые в работе с клетками человека, требуют для проникновения реагентов, повышающих проницаемость мембраны. Однако на инфузорий эти реагенты не действуют. В клетках инфузорий красители обычно поглощаются путём фагоцитоза и оказываются внутри мембранных органелл, что создаёт проблему их доставки.

В исследовании, опубликованном в журнале Water Biology and Security, команда учёных из Китая разработала простой и адаптируемый метод окрашивания тубулина/ресничек, дающий отличные результаты на инфузориях.

«Наш метод предполагает использование живо-клеточных красителей тубулина для окрашивания фиксированных клеток инфузорий, что представляет собой высокоэффективную и практичную опцию для исследований», — говорит ведущий автор Тинтин Пан. «Более того, он позволяет при необходимости легко комбинироваться с иммунофлуоресцентным окрашиванием с помощью антител».

Новый метод окрашивания тубулина предлагает сообществу исследователей инфузорий четыре значительных преимущества:

1. Ускоряет клеточно-биологические исследования, особенно в области изучения цитоскелета, поскольку тубулиновые цитоскелеты широко распространены у этих организмов.
2. Упрощает процесс окрашивания, что полезно для морфологических и таксономических исследований и делает метод доступным для большинства таксономических лабораторий.
3. В сочетании с конфокальной микроскопией метод позволяет детально изучать паттерны базальных телец — важные таксономические признаки — используя всего несколько клеток и избегая сложностей традиционных методов импрегнации серебром.
4. Экологические исследования инфузорий также получат выгоду от этого метода.

«Гибкость метода позволяет окрашивать смешанные популяции клеток из водной среды после их обогащения с помощью планктонной сети», — добавляет Пан. «По мере развития высокопроизводительной флуоресцентной визуализации наш метод окрашивания может легко интегрироваться в системы классификации на основе машинного обучения благодаря своей способности давать изображения с чётким фоном».