Новый метод культивирования эмбрионов птиц ex ovo
Куриные эмбрионы — классическая модель для изучения развития, но ранние стадии сложно изучать внутри яйца. Существующие методы культивирования ex ovo громоздки и обеспечивают короткое время выживания.
Исследователи из Лаборатории раннего эмбриогенеза (Япония) под руководством Хироки Нагаи разработали новый метод, названный «модифицированный корниш-пасти» (MC). Он описан в журнале Genesis и проще в исполнении, чем предыдущие аналоги.
Суть метода
Эмбрион извлекают из яйца на стадии примитивной полоски (HH3–HH4 по шкале Гамбургера-Гамильтона), складывают вдоль оси, параллельной полоске (получается форма полумесяца), и переносят в культуральную среду. В течение 24 часов большинство эмбрионов «надуваются» за счёт активного транспорта жидкости и всплывают. Этот процесс важен для поддержания натяжения эпибласта, критичного для развития.
Результаты
- Около половины эмбрионов, культивируемых по методу MC, выживали с нормальной морфологией до стадии HH18. Это прогресс по сравнению с предыдущими методами (максимум до HH13–HH15).
- Многие особенности формирования сосудов, головы и конечностей начинают проявляться как раз около стадии 18.
- У части эмбрионов развитие головы продолжалось и после HH18, хотя развитие конечностей останавливалось. Это делает метод полезным для изучения более поздних стадий развития головы ex ovo.
Совместимость с другими методами
Метод успешно совместили с ключевыми эмбриологическими техниками:
- Электропорация с GFP: эмбрионы росли нормально и демонстрировали ожидаемую флуоресценцию.
- Парабиоз (совместное культивирование двух эмбрионов в тесном контакте, приводящее к общему кровообращению): с небольшой модификацией метода удалось получить парабиотические пары цыплят, перепелов и даже комбинированные пары цыплёнок-перепел. Такие системы полезны для изучения кроветворения.
«Курица — замечательный модельный организм, но метод "модифицированного корниш-пасти" показывает, что мы до сих пор плохо понимаем эмбрион. Никто не мог предсказать, что таким способом можно создать близнецов и парабиоз», — отмечает Шэн. Следующая цель — использовать эту технику для проверки гипотез о происхождении дефинитивных гемопоэтических стволовых клеток.