CRISPR/Cas9 как цитогенетический "факел": новый метод маркировки ДНК без денатурации

Исследователи из Института генетики растений и исследований культурных растений им. Лейбница (IPK Gatersleben) разработали новый метод цитогенетической маркировки — RNA-guided endonuclease in situ labelling (RGEN-ISL), основанный на системе CRISPR/Cas9.

Суть метода

В отличие от традиционной флуоресцентной гибридизации in situ (FISH), требующей денатурации ДНК, RGEN-ISL использует CRISPR/Cas9 для направленной маркировки целевых последовательностей без нарушения нативной структуры хроматина. Это позволяет изучать пространственно-временную организацию генома.

Ключевые преимущества

• Сохранение структуры: Не требует денатурации ДНК, что предотвращает повреждение образца.
• Гибкость: Работает в широком диапазоне температур (от 4°C до 37°C).
• Совместимость: Может комбинироваться с методами детекции белков (иммуногистохимия).
• Наблюдение в реальном времени: Позволяет визуализировать кинетику процесса маркировки.
• Эффективность: Требует меньше подготовки, быстрее и дешевле, чем комбинация FISH с иммуногистохимией.

Применение и перспективы

Метод успешно протестирован на растительных образцах и человеческих хромосомах, что указывает на его потенциальную применимость ко всем организмам.

В настоящее время RGEN-ISL эффективен для маркировки повторяющихся последовательностей ДНК, часто встречающихся в геномах растений. По мнению доктора Такаёси Исии (Tottori University, Япония), автора идеи метода, в будущем его можно адаптировать для визуализации даже уникальных (single-copy) последовательностей.