Более быстрый и эффективный CRISPR-редактинг у мышей

Ученые Калифорнийского университета в Беркли разработали более быстрый и эффективный метод изменения генов мышей с помощью CRISPR-Cas9, упрощая процедуру, популярность которой растет из-за простоты использования нового инструмента редактирования генов.

Новый метод, названный CRISPR-EZ (CRISPR RNP electroporation of zygotes), делает редактирование генома в эмбрионах мыши еще проще.

Ключевым нововведением стала замена микроинъекции на электропорацию — простую лабораторную технику, использующую электрический импульс для создания пор в эмбрионах, через которые могут проникать молекулы. Это позволяет вводить CRISPR-Cas9 молекулы почти со 100% успехом.

В пилотном эксперименте команда успешно инактивировала обе копии целевого гена у 88% родившихся мышей. Процедура CRISPR-EZ привела к значительно большему числу отредактированных мышей по сравнению с CRISPR-микроинъекцией, в основном из-за существенного улучшения жизнеспособности эмбрионов (30–50% против 10–15%).

Важным аспектом метода стала доставка в эмбрион уже собранных белково-РНК комплексов (RNP) Cas9 с гидовой РНК, а не раздельных молекул мРНК для Cas9 и гидовой РНК. Это повысило эффективность редактирования.

Для более сложной процедуры — модификации короткой последовательности ДНК внутри гена — метод был успешен в 42% случаев в пилотном эксперименте.

Высокая эффективность редактирования и жизнеспособность эмбрионов означают, что исследователям нужно использовать меньше мышей и они могут проводить несколько трансгенных экспериментов одновременно.

Как отметил Рассел Вэнс, с появлением CRISPR и улучшений, таких как CRISPR-EZ, стоимость и время создания нокаутной мыши сократились как минимум в 10 раз (ранее ≥$25 000 и ≥6 месяцев).