Интеграция векторов AAV в CRISPR-индуцированные разрывы ДНК

Исследование показало, что адено-ассоциированные вирусы (AAV) могут стабильно интегрироваться в CRISPR-Cas9-индуцированные двуцепочечные разрывы с эффективностью до 47% in vitro и in vivo у мышей. Это означает, что почти половина терапевтически нацеленных клеток демонстрирует этот неожиданный исход.

Ключевые выводы:

• CRISPR не вызывает увеличения интеграции AAV по всему геному — она повышается только в сайте разреза, созданного CRISPR.
• Контрольные образцы без направляющей РНК (gRNA) не показали увеличения интеграции сверх базового уровня, что подтверждает высокую специфичность системы.

Контекст и значение:

AAV — наиболее широко используемый вектор для доставки генной терапии. Обычно он редко интегрируется в геном (<0,1%). Однако при доставке компонентов для геномного редактирования (CRISPR) ситуация меняется.

Исследование, проведённое на нескольких органах (мозг, внутреннее ухо, мышцы), указывает, что интеграция AAV является одним из исходов редактирования генома in vivo, и её необходимо учитывать при оценке безопасности.

Цитата руководителя исследования Бенце Дьёрдя:

"Это исследование помогает лучше понять геномные последствия терапевтического редактирования генома... Мы не ожидаем, что эта сайт-специфичная интеграция AAV влияет на профиль безопасности, поскольку при хорошо спроектированных gRNA нет увеличения интеграции AAV в нецелевых сайтах".