Быстрое и точное обнаружение мРНК в тканях растений

Исследователи из Dow AgroSciences продемонстрировали эффективность нового метода in situ гибридизации (ISH) — RNAscope ISH — для изучения экспрессии генов в растениях. В отличие от традиционных подходов, этот метод значительно быстрее и обладает высокой чувствительностью, позволяя не только обнаруживать, но и точно количественно оценивать уровни экспрессии целевых генов.

Проблема традиционных методов

Традиционные методы ISH, используемые для определения присутствия конкретных молекул мРНК в тканях растений, часто требуют много времени и труда, а также недостаточно чувствительны для точного количественного анализа экспрессии генов.

Принцип работы RNAscope ISH

Метод, разработанный Advanced Cell Diagnostics (ACD) Inc., представляет собой разновидность разветвлённой ДНК ISH. Он использует пары «Z-проб», которые высокоспецифичны к целевым генам и достаточно малы для легкого проникновения в исследуемые ткани. Связывание Z-проб с целевыми молекулами мРНК позволяет присоединить метки, делая мРНК обнаруживаемой с помощью флуоресцентной или хромогенной детекции.

Ключевые преимущества

• Наглядность и точность: Обнаруженные молекулы мРНК видны как отдельные точки внутри клетки, что упрощает интерпретацию. Метод имеет очень низкий фоновый уровень.
• Доступность: Компания-разработчик предоставляет услуги по дизайну и синтезу проб, что снижает требуемый уровень экспертизы для проведения эксперимента.
• Скорость: Получение проб занимает около двух недель с момента отправки последовательности гена. Сам эксперимент длится примерно 8–10 часов, в то время как классические методы ISH могли требовать одной или даже двух ночных инкубаций.

Как отметил ведущий автор исследования доктор Эндрю Боулинг, с методом RNAscope «экспериментальные срезы имеют точки, а контрольные — нет. Результаты очень четкие».