Модификация признаков томата и сигналинга фитогормонов с помощью Target-AID для эффективной замены нуклеотидов
Учёные из Университета Цукубы разработали новый инструмент для редактирования генома на основе CRISPR/Cas9 — Target activation-induced cytidine deaminase (Target-AID). Они применили его к генам SlDELLA и SlETR в модельном сорте томата «Микро-Том» и в коммерческих сортах, чтобы подтвердить и расширить применимость системы.
После подтверждения индуцированных замен нуклеотидов были изолированы мутанты, показавшие высокую чувствительность к гиббереллину (GA) как у «Микро-Тома», так и у коммерческих сортов. Замена нуклеотидов также была успешно индуцирована при:
Мультитаргетинге с одной sgRNA
Мультитаргетинге с несколькими sgRNA в одном векторе
Кроме того, система Target-AID создала специфичный для неё паттерн делеций/вставок (indels) в позициях, отличных от тех, что редактируются векторами с Cas9.
«Мы демонстрируем, что система Target-AID может эффективно редактировать сайты, нацеленные sgRNA, и способствует применению технологий редактирования оснований в трансляционных исследованиях, направленных на коммерциализацию геномно-отредактированных сельскохозяйственных культур», — сказал профессор Эдзура.
Результаты показывают, что система редактирования генома Target-AID является перспективным инструментом для молекулярной селекции томатов, подчёркивая научный и сельскохозяйственный потенциал её совместного использования с другими системами редактирования оснований.
Исследование опубликовано в Horticulture Research.